rna提取步骤及原理（rna提取的过程）

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用郑亮酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

5、正轿表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

7、碱变性快举丛肆速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

扩展资料：

DNA提取原则：

1、保证核酸一级结构的完整性；

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

参考资料来源：百度百科——DNA提取

用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理.

实验步骤：

1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡羡枯以裂解细胞；

2. 将兄做洞上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在试问15~30℃下放置5分钟；

3. 在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15~30℃）放置2~3分钟后，12000g（2~8℃）离心15分钟；

4. 去上层水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15~30℃）放置10分钟后，12000g（2~8℃）离心10分钟；

5. 弃上清，按照每1ml Trizol加1ml75% 乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2~8℃）离心5分钟，弃上清；

6. 让沉淀的RNA在室温在自然干燥；

7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀

各试剂的作用：

1、 TRIZOL

主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。

TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。

※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。

※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并胡山使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

2、 氯仿

为有机溶剂与水互不相溶，RNA（核糖核“酸”的盐型）是离子化合物，溶于水相

3、异丙醇

能与与任意比例的水混合，因此加入异丙醇，能够夺取RNA/DNA周围的水分，RNA/DNA能够聚集而发生沉淀。

1、RNA抽提原理

简单地讲，RNA抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的RNA游离在裂解体系中的过程，纯化则是使RNA与裂解体系中的其它成分，如DNA、蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。Trizol试剂的出现基本能解早明决绝大部分样品RNA抽提，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流。

2、了解你的实验样品

如果你研究某个实验样品，并且要抽提它的RNA，以下的信息一定要先行收集：该样品的RNA含量、酶含量、特殊杂质含量。如果你对样品的特点一无所知，当样品稍微有一点复杂时，抽提RNA的实验就会碰到许多问题。以血液为例，如果你不知道鸟的血液中有核细胞的含量是人血的千倍扰皮左右，而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组DNA，怎么可能成功？失败了又怎么知道原因所在？同时，只有对实验样品有所了解，才能正确选择抽提方法。但同时提醒的是：没有信息是可怕的，更可怕的是将错误的信息当真的了。

3、实验样品量的取用

样品与Trizol的比例。这个问题非常重要，应该获得足够的重视。Trizol的Protocol，提供了一个简单的比例，1ml裂解液可以用于50-100mg组织或5-10X106个细胞；我的建议是，样缓睁差品量绝对要小于资料所提供的。起始样品用多大，并没有具体的说法。如果不是样品量有限，则以能抽提出满足数次成功实验所需的RNA，作为决定样品起始量的基础，会比较合理的。不要因为1ml裂解液可以抽提 100mg 样品，就一定使用 100mg 样品。裂解液的用量，表面上与抽提的结果 (纯度及得率) 没有关系，然而，在实际操作中，对结果是有比较大的影响的。裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。不同得样品其RNA含量差别很大。

真菌菌丝的总RNA的提取

RNA提取缓冲液（CTAB）：2%

CTAB（W/V），2%

聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100

mM

Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM

EDTA,

0.5g/L

亚精胺Spermidine，2.0M

NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC

处理的水配制即可。

SSTE：1

M

NaCl，0.5%

SDS（W/V），10

mM

Tris-HCl

pH8.0，1.0

mM

EDTA

10M

LiCl

直接用蒸馏水配10M

LiCl，加1‰的DEPC过夜后，高温灭菌。

3M

NaAc

氯仿:异戊醇（24:1）

酚（pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）

DEPC处理水

用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜，高温灭菌

无水乙醇

70%酒精

1.

实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME（巯基乙醇）（10mL加80ul，50mL中加入300ul）。

2.取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了），在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50

mL离心管，按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液，颠倒混匀。

3.

65℃水浴3-10

min，期间混匀2-3次

4.

加入等体积的酚（注意是酸酚pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提（10,000

rpm，4℃，5

min）芦物

5.

取差哗虚上清，等体积的氯仿:异戊醇（24:1）抽提（10,000

rpm，4℃，5

min）

6.

加入1/4V体积10M

LiCl溶液，4℃放置6hr以上(或过夜)

7.

10,000

rpm，4℃离心20

min

8.

弃上清，用500

ulSSTE溶解沉淀

9.

酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提两次,

氯仿:异戊醇（24:1）抽提1次（10,000

rpm，4℃，5

min）

10.

加2V体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30

min以上

11.

12,000

rpm，4℃离心20

min

12.

弃上清。沉淀用70%酒精虚燃漂洗一次，干燥

13.

加200

ul的DEPC处理水溶解

14.

用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

（在抽提过程中，若蛋白质含量或其它的杂质还较多，可以增加抽提次数）

注意：提取RNA请尽量在低温下操作，如果条件不容许，在室温下操作的时间要尽可能的短。

上述文章内容就是对rna提取步骤及原理和rna提取的过程的介绍到此就结束了，希望能够帮助到大家；当然如果你还想了解更多这方面的信息，请多多关注我们哦！