二苯胺(an)试剂鉴定dna的原理（二苯胺试剂鉴定DNA的原理啥色）

原理DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω–羟基–γ–酮基戊醛，与二苯(ben)胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595）。在DNA浓度为20～200μg/ml范围内，吸(xi)光度与DNA浓度成正比(bi)，可用比色法测定。在反应液中加入少量乙醛，可以提高(gao)反应灵敏度。除(chu)DNA外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有(you)同样的反应。其他多数糖(tang)类，包括核糖在内，一般无此反应。操作步骤标准曲线的绘制 按下(xia)表加入各种试剂(ji)，混匀，于60℃恒温水浴(yu)保温45min,冷却后，在595nm波长下，进行比色测定，以DNA浓度为轮段或横坐标，光吸(xi)收值为纵坐标，绘制标准曲(qu)线。管号试剂012345标准DNA溶液/ml0.00.40.81.21.62.0蒸馏水/ ml2.01.61.20.80.40二苯胺试剂/ ml4.04.04.04.04.04.0A595nm样品的测定 取2支试(shi)管，各加DNA样液1.0，蒸馏水1.0ml，混匀。然(ran)后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于60℃恒(heng)温水浴保温45in ，冷却后，选595nm波长，于722分(fen)光光度计上比色(se)测定，根据所得的吸光度对标准曲线(xian)求得DNA的质(zhi)量（μg）。DNA含量的计算 根燃者据测得的光吸(xi)收值，从标准曲线(xian)上查出相当该光吸(xi)收值DNA的含量(liang)，按下式计算出(chu)样品中DNA的含量。W= m1/m2×100%式(shi)中W：DNA的质量分数（%）；m1：样液中测得的DNA的(de)质量（μg）；m2：样(yang)液中所含样品的质量（μg）；试剂和器材一、试剂1. DNA标准溶液（200μg/ml）：取(qu)小牛胸腺DNA钠盐(yan)以0.01mol/L氢氧化钠(na)溶液配置成200μg/ml的溶液。2. DNA样液：准(zhun)确称取DNA干(gan)制品以0.01mol/L氢氧化钠(na)溶液配置成100μg/ml左(zuo)右的溶液。3. 二苯胺(an)试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70%乙醇(chun)中重结晶2次）1g溶于100ml分析(xi)纯的冰醋酸中，再加入10ml过氯酸（A.R.,60%以上），混(hun)匀待用。当所用药品纯净时，配得(de)试剂应为无色，临用前(qian)加入1ml1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱(xiang)中，一周内可使用），贮(zhu)于棕色瓶。0.01mol/L NaOH溶液 5. 冰(bing)醋酸。6. 过氯酸(suan)。7. 1.6%乙醛溶(rong)液。二、器材1.坐标纸(zhi)腊伍。2. 吸(xi)管0.20ml、0.50ml、1.0ml。3. 试管1.5cm×15cm。4. 722型分光光度计。5. 恒温(wen)水浴锅标准曲线见

到底用什么来鉴定DNA 甲基绿还是二苯胺

用甲基(ji)绿来鉴定DNA。DNA遇甲基(ji)绿（常温）会被染成蓝绿色。

甲基绿是雀扮具培纤有金(jin)属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末(mo)。溶于水，显蓝绿色。为碱性染料，它易与聚合(he)程度高的DNA结合呈现绿色。

又称双绿SF。绿色晶体，具金(jin)黄色光泽，或淡绿色粉末。溶于水，呈(cheng)蓝绿色。微溶于乙醇，不溶于乙(yi)醚、戊醇。

扩展资料：

甲基绿操作注意事项：

1、操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程。

2、操作处置应在(zai)具备局部通风或全顷中灶面(mian)通风换气设施的场所进行。

3、避免眼和皮(pi)肤的接触，避免吸入蒸(zheng)汽。

4、远离火种、热(re)源，工作场所严禁吸烟。

5、使用防爆型的通(tong)风系统和设备。

6、如需罐装，应(ying)控制流速，且有接地装置(zhi)，防止静电积聚。

7、避免与氧化剂等禁配物(wu)接触。

8、搬运时要轻装轻卸，防(fang)止包装及容器损坏。

9、倒空的容器可(ke)能残留有害物。

10、使用后洗手，禁止在工作场所(suo)进饮食。

11、配备(bei)相应品种和数量的(de)消防器材及泄漏应急处(chu)理设备。

参考资料来(lai)源：百度百科-甲基绿

参考资料来源：百(bai)度百科-脱氧核糖核酸

二苯(ben)胺与DNA反应(ying)的本质：DNA在酸性条件下加(jia)热，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断(duan)裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖(tang)和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱(tuo)氧核糖在酸性环境中(zhong)加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊(wu)醛，后者与二苯胺试剂反应生成蓝色(se)物质。

二苯胺的乙醇溶液加入(ru)9体积的浓硫酸（形成强酸性溶(rong)液）配制成二苯(ben)胺试剂，本试剂遇硝酸盐(yan)或硝酸产生蓝色(se)的苯胺蓝沉淀，可用于鉴(jian)定硝酸盐。

扩展资料：

二苯胺试剂：

A液：1.5克二苯胺溶于100ml冰醋酸(suan)中，再加1.5ml浓硫酸，用棕色瓶(ping)保存（光下分解）。如冰醋酸呈结晶状态(tai)，则需加温后待其熔化再使用。

B液：体(ti)积分数为0.2%的乙醛溶液(ye)(CH3CHO)。

配制：将0.1mlB液加入10mlA液中，煮沸观察显色。

合成方法：

1、苯胺盐酸盐法：由苯胺与苯胺盐酸盐缩(suo)合而得。

2、三氯化铝催化法：以苯胺(an)为原料，三氯做拿化铝为(wei)催化剂，经缩合反应而得。

3、苯(ben)酚缩合法：采用HD92催化剂，由苯酚与苯胺缩合(he)而得。

4、苯胺以无水三氯化铝为催(cui)化剂，进行缩合反应。反应产物经盐酸盐析、氢氧化钠中合、和则煮洗、真空蒸馏、用乙醇结晶、分离即得(de)成品。

5、工业(ye)二苯胺经精制制得。

6、用纯棚搭氰化(hua)钾洗涤工业二苯胺，与铁、其他金属络合后，与(yu)二苯胺分开。

7、在氮气流中把二苯胺(an)减压蒸馏即得成品。

参考资料来源：百度(du)百科-二苯胺

其鉴定原理基(ji)于二苯胺能够与缺(que)失的核苷酸形成磷酸亚胺，并(bing)与DNA中的未配对(dui)碱基生成特定的化学染色野枝盯(ding)反应，显色程度与未配对(dui)的碱基数量成正比(bi)。因此，二苯胺试剂的检测结论受到(dao)多种因素的影响，如试剂的质量、反应条件、DNA质量、存储条件等等。此外(wai)，DNA样搭和本(ben)可能包含各种杂质，颂和如酶、盐等(deng)，这些杂质可能干扰试(shi)剂的正常反应，导致检测结(jie)果不准确。因此，在使用(yong)二苯胺试剂鉴定DNA时，需(xu)要注意检验环境与条件，同时，需(xu)保证DNA样本的纯度和(he)完整性。

上述文章内容(rong)就是对二苯胺试剂鉴定dna的原理和二苯胺试剂鉴定DNA的原理啥色的介绍到此就结束(shu)了，希望能够帮(bang)助到大家；当然如果你还想了解更多(duo)这方面的信息，请多(duo)多关注我们哦！